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本制品是专用于免除样品的核酸提取纯化步骤，直接进行荧光定量PCR检测（TaqMan或Molecular Beacon等）的专用试剂。本品具有很强的抑制物耐受性，无需进行DNA提取纯化，可用于抗凝全血、血浆、血清等样品的DNA直接扩增检测。运用了dUTP-UDG防污染系统，在PCR反应过程中加入dUTP形成含有dU碱基的扩增产物，此产物可在下次PCR反应前被体系内的UDG酶消化，从而有效防止PCR产物污染造成的假阳性。

本制品是将HotStart Taq DNA聚合酶、UDG酶、优化的反应Buffer、dNTPs、保护剂、赋形剂等试剂预混制成液体试剂，液体试剂中不含甘油及其他影响冻干的成分，可用于冻干样品的制备，以提高样品的稳定性和易用性。进行实验时，加入引物、探针、模板、水即可配制完成PCR反应液。本品采用特殊工艺制备的HotStart Taq DNA聚合酶并结合特别优化的反应及冻干配方制成的冻干试剂，能有效抑制非特异性反应，提高了反应特异性和扩增效率，能够在更广的范围内进行准确定量。并配有不同浓度的ROX Reference Dye，用于不同仪器校正孔间荧光信号误差。

• 该产品可用于制作冻干粉和冻干小球；
  
• 采用特殊工艺制造的HotStart Taq DNA聚合酶配制的反应缓冲体系，可耐受血液中各种抑制剂，可耐受10%全血模板；
  
• 扩增范围广，可检测各种抗凝血剂的新鲜及冻存血液；
  
• dUTP-UDG系统有效防止PCR产物污染造成的假阳性；
  
• PCR反应所必需试剂集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

• 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡；
  
• qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用；
  
• 推荐血液模板使用量为反应总体积的10%，即20μL反应体系中加入2μL全血作为模板，注意避免吸取血液凝块；
  
• 建议试剂预混、模板添加和检测三个过程尽可能在不同的密闭区域进行，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染；
  
• 本制品中已含有冻干辅料，可直接进行冻干，若需增加其他冻干辅料，需根据实际检测数据评估后增加。

• 冻干小球体系制备
  
  • 根据以下常用体系进行冻干小球体系配制：
    

    成分	用量	终浓度
    2×Blood Direct Probe qPCR SuperMix(UDG)	10μL	1×
    10×Primer Mix	2μL	1×
    RNase-Free Water	至20μL

    注：10×Primer Mix包含2～10μM上游引物、2～10μM下游引物和5μM探针。
    
  • 将上述液体样品进行冻干；
    
  • 冻干后样品加入(20-X) μL RNase-Free Water复溶之后，再加入X μL的模板进行反应，反应时总体积为20μL；
• 冻干粉样品制备及使用
  
  • 将2×Blood Direct Probe qPCR SuperMix(UDG)根据需求进行冻干样品制备；
    
  • 将冻干制备后的样品加入相应体积的RNase Free Water进行溶解即可使用；
• 推荐程序
  

  反应阶段	温度	时间	循环数
  污染消化	50℃	2min	1
  预变性	95℃	5min	1
  变性	95℃	10s	35～45
  退火/延伸	60℃	30～60s

• ROX I校准的Real Time PCR仪有：
  ABI 5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast;
  ABI StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
  
• 用ROX II校准的Real Time PCR仪有：
  ABI 7500/7500 Fast；ABI ViiA7;ABI Q5 Q6;
  ABI Quant Studio 6/7 Flex;Stratagene MX4000/MX3500P/MX3000P及其他仪器。
  
• 不需要用ROX校准的Real Time PCR仪有：
  Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/iQ/My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon/Chromo4；
  Eppendorf MasterCyclerrealplex/realplex 2s。
  Cepheid SmartCycler；Illumina Eco qPCR；
  Roche Applied Science LightCycler 480；
  Thermo Scientific PikoReal Cycler；
  Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。